มากกว่าห้องที่สะอาดหรือสภาพแวดล้อมที่ถูกควบคุม ตามมาตรฐาน ISO 14644-1 คำจำกัดความห้องสะอาด ห้องสะอาดถูกกำหนดดังนี้:
"ห้องที่ควบคุมความเข้มข้นของอนุภาคในอากาศ และสร้างขึ้นและใช้งานโดยลดปริมาณการเข้ามา การก่อกำเนิด และการกักเก็บอนุภาคภายในห้องให้เหลือน้อยที่สุด และควบคุมพารามิเตอร์อื่นๆ ที่เกี่ยวข้อง เช่น อุณหภูมิ ความชื้น และความดัน ตามความจำเป็น"
การลดการเข้ามา การสร้าง และการกักเก็บอนุภาคในห้องสะอาดทำได้ 3 วิธี:
- จ่ายอากาศจำนวนมากเข้าไปในห้องด้วยตัวกรองประสิทธิภาพสูง (ตัวกรอง HEPA หรือ ULPA) อากาศที่ผ่านการกรองจะเจือจางและกำจัดอนุภาค แบคทีเรีย และสารเคมีออกจากภายในห้อง อากาศยังใช้เพื่อเพิ่มแรงดันในห้องและให้แน่ใจว่าอากาศในห้องปลอดเชื้อจะไหลเวียนได้
- ห้องคลีนรูมนั้นจะต้องสร้างขึ้นด้วยวัสดุที่ไม่ก่อให้เกิดสารปนเปื้อน อนุภาค หรือสารเคมีในอากาศ และจะต้องทำความสะอาดได้ง่ายด้วย
- ผู้ปฏิบัติงานห้องปลอดเชื้อต้องสวมเสื้อผ้าที่ช่วยลดการแพร่กระจายของอนุภาคและจุลินทรีย์ที่เกิดจากคน เช่น เส้นผม สะเก็ดผิวหนัง เส้นใยเสื้อผ้า เป็นต้น ในความเป็นจริง การปนเปื้อนจากฐานผู้ปฏิบัติงานคิดเป็น 70% ถึง 80% ของการปนเปื้อนในห้องปลอดเชื้อ เพื่อลดความเสี่ยงของการปนเปื้อน ผู้ปฏิบัติงานห้องปลอดเชื้อมักจะสวมเสื้อผ้าในห้องแต่งตัว ซึ่งเรียกอีกอย่างว่าห้องด้านหน้า นอกจากนี้ยังสามารถใช้ฝักบัวอากาศได้อีกด้วย
